دوره 6، شماره 17 - ( تابستان 1402 )
جلد 6 شماره 17 صفحات 993-979 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Hajmohammadi Z, Khandan Dezfully N, Amini K. Genomic Investigation and Cloning of the Fibrinolytic Gene (bsfA) of Thermophilic Soil Bacillus in Escherichia Coli Origami by Molecular Method, Real Time PCR and SDS Technique. J Altern Vet Med 2023; 6 (17) :979-993
URL: http://joavm.kazerun.iau.ir/article-1-132-fa.html
URL: http://joavm.kazerun.iau.ir/article-1-132-fa.html
حاج محمدی زهرا، خندان دزفولی نوشین، امینی کیومرث. بررسی ژنومی وکلونینگ ژن فیبرینولیتیک (BsfA) باسیل ترموفیل خاک در باکتری اشریشیا کلی اوراگامی با روش مولکولی Real time PCR و تکنیک SDS. مجله طب دامپزشکی جایگزین. 1402; 6 (17) :979-993
1- کارشناس ارشد میکروبیولوژی، گروه بیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد سیرجان، دانشگاه آزاد اسلامی، کرمان، ایران
2- استادیار گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد سیرجان، دانشگاه آزاد اسلامی، سیرجان، ایران ،nooshinkh@yahoo.com
3- دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران
2- استادیار گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد سیرجان، دانشگاه آزاد اسلامی، سیرجان، ایران ،
3- دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران
چکیده: (98 مشاهده)
زمینه و هدف: آنزیم ها نقش بسیار مهمی در صنایع مختلف و در پزشکی دارند. ناحیه ژنومی bsfA نیز یکی از اپران‌های بسیار مهم در زیست فناوری و زیست مهندسی به شمار می رود و در تهیه داروهای شکننده فیبرین (فیبرینولیتیک) یا داروهای شکننده لخته برای از بین بردن لخته خون در عروق (درمان ترومبوزیس و سکته قلبی) به کار می‌روند و می توان ازاین آنزیم در موارددرمانی استفاده کرد. باسیلوس ترموفیل حامل ژن های آنزیمی مختلفی بوده و هدف بررسی ژنومی و کلونینگ ژن فیبرینولیتیک (bsfA) از باسیل های ترموفیل خاک در باکتری اشریشیاکلی اوراگامی با روش Real time PCR و SDS PAGE است.
مواد و روش ها: سویه باسیلوس از مجموع 70 نمونه خاک مناطق اطراف تهران جداسازی و تعیین هویت شدند. سپس با روش PCR ژن bsfA از باسیلوس ها استخراج شد. قطعه تکثیر یافته توسط روش TA کلونینگ (Transfer activity) به داخل وکتور بیانی pTG19 وارد شد. در مرحله بعد وکتور نوترکیب به باکتری اشریشیا کلی اوراگامی ترانسفورم شد و با استفاده از روش های رایج تایید کلونینگ انجام گردید. واکنش PCR برای ژن bsfA با پرایمر ذکر شده انجام شد.
یافته ها: در نتیجه از 12 سویه باسیلوس جدا شده همگی (100%) واجد ژن bsfA بودند. نتایج کلونینگ RNA کلنیهای مشکوک استخراج شده cDNA ساخته شده و توسط آزمون Real time PCR میزان بیان ژن bsfA بررسی شدند. تعیین هویت مولکولی جنس باسیلوس حامل ژنbsfA از پرایمرخانگی استفاده گردید. در نهایت با سکانس محصول PCR بیان ژن bsfA در باکتری اشریشیاکلی اوراگامی تایید شد.
نتیجه گیری: در نتیجه این پژوهش موفق به یافتن باسیلوس های بومی مولد bsfA شدند که در نهایت، با موفقیت ژن این آنزیم از باکتری باسیلوس به باکتری E.coli منتقل شد تا بتوان با تولید بیشتر و صرفه اقتصادی این آنزیم را در E.coli تولید کرد. برای ایجاد باکتری با قابلیت نوترکیب و بیان بالا، می تواند گام بزرگ در مسیر افزایش تولید این آنزیم در درمان بیماران دچار ترمبوزیس محسوب شده که مانع از ایجاد آمبولی و مرگ می گردد.
مواد و روش ها: سویه باسیلوس از مجموع 70 نمونه خاک مناطق اطراف تهران جداسازی و تعیین هویت شدند. سپس با روش PCR ژن bsfA از باسیلوس ها استخراج شد. قطعه تکثیر یافته توسط روش TA کلونینگ (Transfer activity) به داخل وکتور بیانی pTG19 وارد شد. در مرحله بعد وکتور نوترکیب به باکتری اشریشیا کلی اوراگامی ترانسفورم شد و با استفاده از روش های رایج تایید کلونینگ انجام گردید. واکنش PCR برای ژن bsfA با پرایمر ذکر شده انجام شد.
یافته ها: در نتیجه از 12 سویه باسیلوس جدا شده همگی (100%) واجد ژن bsfA بودند. نتایج کلونینگ RNA کلنیهای مشکوک استخراج شده cDNA ساخته شده و توسط آزمون Real time PCR میزان بیان ژن bsfA بررسی شدند. تعیین هویت مولکولی جنس باسیلوس حامل ژنbsfA از پرایمرخانگی استفاده گردید. در نهایت با سکانس محصول PCR بیان ژن bsfA در باکتری اشریشیاکلی اوراگامی تایید شد.
نتیجه گیری: در نتیجه این پژوهش موفق به یافتن باسیلوس های بومی مولد bsfA شدند که در نهایت، با موفقیت ژن این آنزیم از باکتری باسیلوس به باکتری E.coli منتقل شد تا بتوان با تولید بیشتر و صرفه اقتصادی این آنزیم را در E.coli تولید کرد. برای ایجاد باکتری با قابلیت نوترکیب و بیان بالا، می تواند گام بزرگ در مسیر افزایش تولید این آنزیم در درمان بیماران دچار ترمبوزیس محسوب شده که مانع از ایجاد آمبولی و مرگ می گردد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
میکروبیولوژی
دریافت: 1402/1/4 | پذیرش: 1402/2/14 | انتشار: 1402/6/10
دریافت: 1402/1/4 | پذیرش: 1402/2/14 | انتشار: 1402/6/10
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |